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Evaluation du stress oxydant
Pour aborder le stress oxydant, le laboratoire Bio-PeroxIL dispose de plusieurs approches :

1. Approche de cytométrie en flux
   * Quantification des espèces radicalaires de l’oxygène et / ou de l’azote à l’aide de différents fluorochromes : H2DCF-DA (ROS, RNS, peroxynitrite), dihydroéthidine (DHE) (anions superoxydes), DAF-2 (NO), DHR123 (H2O2), quantification des ROS au niveau mitochondrial (MitoSox).
   * Quantification de la peroxydation lipidique (immunomarquage avec l’anticorps anti-4HNE)
2. Approche microscopique
   * Quantification de la peroxydation lipidique (immunomarquage avec l’anticorps anti-4HNE)
   * Quantification des cellules contenant du glutathion réduit (coloration au monochlorobimane)
3. Approche biochimique
   * Quantification de la peroxydation lipidique : mesure des diènes conjugués ; mesure du MDA par la technique des TBARS.
   * Dosage des activités d’enzymes anti-oxydantes : catalase (CAT), superoxyde dismutase (SOD), glutathion peroxydase (GPx).
   * Dosage du glutathion réduit (GSH)
4. Analyses complémentaires par chromatographie en phase gazeuse associée à la spectrométrie de masse.
   En collaboration avec la plateforme de lipidomique de l’Université de Bourgogne, nous effectuons aussi des dosages d’isoprostanes, HODEs, oxystérols (marqueurs de peroxydation lipidiques) sur des extraits cellulaires.

Evaluation par cytométrie en flux de la toxicité associée à des nanoparticules
Le laboratoire s’intéresse à la toxicité des nanoparticules sur les organites cellulaires (mitochondrie, lysosome, peroxysome), sur l’équilibre RedOx et l’inflammation en proposant différentes techniques de cytométrie en flux

1. Impact sur la mitochondrie
   Potentiel transmembranaire mitochondrial (coloration au DiOC6(3)) ; surproduction d’espèces réactives de l’oxygène (coloration au MitoSox) ; masse mitochondriale/biogénèse (coloration au MitoTracker, coloration à la nonylacridine orange).
2. Impact sur le lysosome
   Impact sur la fonction lysosomale (activité de la pompe à protons : coloration à l’acridine orange) ; masse lysosomale/biogénèse (immunofluorescence, quantification de l’expression de Lamp2).
3. Impact sur le peroxysome
   Impact sur la masse peroxysomale/biogénèse ((immunofluorescence, quantification de l’expression d’ABCD3 et de la catalase).
4. Impact sur le stress oxydant
   * Quantification des espèces radicalaires de l’oxygène et / ou de l’azote à l’aide de différents fluorochromes : H2DCF-DA (ROS, RNS, peroxynitrite), dihydroéthidine (DHE) (anions superoxydes), DAF-2 (NO), DHR123 (H2O2), quantification des ROS au niveau mitochondrial (MitoSox).
   * Quantification de la peroxydation lipidique (immunomarquage avec l’anticorps anti-4HNE)
5. Impact sur l’inflammation
   Analyse intracellulaire de cytokines et analyse de cytokines sécrétées (microbilles : analyses mutiplexes)

Des études de biochimie et de biologie moléculaires peuvent être faites à la demande afin de compléter les résultats de cytométrie en flux.

Contacts pour étude de faisabilité et devis :
Gérard LIZARD (Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.)
Thomas NURY (Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.)