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Laboratoire Bio-PeroxIL - EA 7270

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  • Proposition de stage M2 recherche Laboratoire Bio-PeroxIL, Dijon

    (Biochimie du Peroxysome, Inflammation et métabolisme lipidique)

     

    INTITULE DE STAGE M2R : caractérisation de modèles cellulaires microgliaux présentant une déficience peroxysomale

    ENCADRANTS

    Stéphane Savary, Professeur des Universités

    Doriane Trompier, Maître de Conférences

     

    CONTEXTE

    L’adrénoleucodystrophie liée à l’X (X-ALD) est une maladie neurodégénérative sévère présentant une incidence de 1 :17 000. Cette maladie est causée par une mutation dans le gène codant pour la protéine peroxysomale ABCD1. ABCD1 et son plus proche homologue, ABCD2, sont impliqués dans le transport d’acides gras à très longue chaîne (AGTLC) dans le peroxysome pour leur dégradation par b-oxydation. Le lien entre le défaut métabolique, conséquence de la mutation du gène ABCD1, et l’apparition de la maladie démyélinisante reste encore indéterminé. Les patients X-ALD ne disposent pas à ce jour de thérapie satisfaisante.

    OBJECTIF GENERAL

    Développer de nouvelles thérapies pharmacologiques et/ou nutritionnelles passe par la compréhension des mécanismes physiopathologiques en jeu. Cependant, l’étude de la physiopathogénèse de l’X-ALD est limitée par l’absence de modèles expérimentaux pertinents.

    STRATEGIE

    Etant donné que (i) la microglie est un acteur central de l’homéostasie cérébrale puisqu’elle participe au maintien de l’intégrité du réseau neuronal et myélinique et que (ii) le défaut microglial semble être l’une des causes princeps du déclenchement des leucodystrophies peroxysomales, notre laboratoire a établi un modèle d’étude microglial pour l’étude de la physiopathogénèse des leucodystrophies peroxysomales qui servira de plateforme de criblage de futures molécules thérapeutiques.

     

    RESULTATS PRELIMINAIRES

    Résultats publiés par le labo

    Les modèles cellulaires microgliaux développés sont issus de la lignée murine BV-2. Ces cellules ont été rendues déficientes en transporteurs peroxysomaux d’AGTLC (ABCD1 et ABCD2) et en enzyme ACOX1 (enzyme qui contrôle la 1ère étape de la b-oxydation peroxysomale) par édition génique CRISPR-Cas9. La validation moléculaire de ces modèles et une caractérisation préliminaire au niveau biochimique et cellulaire ont permis de confirmer les anomalies lipidiques rencontrées dans les leucodystrophies peroxysomales ainsi que des défauts d’expression de certains marqueurs microgliaux importants tels que TREM2 (1,2).

    -----------------------------------------

     1 Q. Raas, F.E. Saih, C. Gondcaille, D. Trompier, Y. Hamon, V. Leoni, C. Caccia, B. Nasser, M. Jadot, F. Menetrier, G. Lizard, M. Cherkaoui-Malki, P. Andreoletti, S. Savary, A microglial cell model for acyl-CoA oxidase 1 deficiency, Biochim. Biophys. Acta 1864 (2019) 567-576.

    2 Q. Raas, C. Gondcaille, Y. Hamon, V. Leoni, C. Caccia, F. Ménétrier, G. Lizard, D. Trompier, S. Savary, CRISPR/Cas9-mediated knockout of Abcd1 and Abcd2 genes in BV-2 cells: novel microglial models for X-linked Adrenoleukodystrophy, Biochim. Biophys. Acta 1864 (2019) 704-714.

     

    STAGE DE MASTER 2

    Analyse transcriptomique non publiée à exploiter

    Une analyse transcriptomique par RNAseq (financée par la Fondation Maladies Rares, subvention de 30 489 euros) a été réalisée sur les cellules BV-2 wt, KO_ABCD1, KO_ABCD2, KO_ABCD1_ABCD2, KO_ACOX1 traitées on non par du LPS et/ou du 25-hydroxy-cholestérol. Cette analyse a permis de mettre à jour des milliers de gènes exprimés de manière différentielle entre les cellules mutantes et les cellules sauvages, nous donnant de précieuses pistes pour caractériser les conséquences du défaut peroxysomal dans la microglie, pistes qui devront être exploitées dans le cadre du stage M2R.

    Impact de la déficience peroxysomale sur les fonctions microgliales

    En s’appuyant sur les données obtenues par RNAseq montrant une dérégulation du groupe de gènes constituant la signature microgliale homéostatique et une dérégulation des groupes de gènes en lien avec le stress oxydant et la phagocytose, l’objectif est de caractériser l’impact des déficiences peroxysomales dans les cellules microgliales au niveau:                     

    • de la signature homéostatique (déterminer les niveaux d’expression des marqueurs homéostatiques et pathologiques, WB, cytométrie en flux).
    • du stress oxydant (niveaux d’expression de protéines clés pro et anti-oxydantes, WB ; niveau de production des ROS, sondes H2DCFDA, DHE, lecteur de fluorescence sur plaque 96 puits ; niveau GSH/GSSG, kit de dosage ; dosage des activités d’enzymes anti-oxydantes ….
    • de la phagocytose (niveau d’expression de protéines clés, WB ; tests fonctionnels de phagocytose de cellules (neurones, oligodendrocytes) apoptotiques et de débris de myéline ; caractérisation des anomalies du cytosquelette d’actine, microscopie à fluorescence ; étude mécanistique avec anticorps fonctionnels / inhibiteurs spécifiques pour identifier les récepteurs membranaires impliqués…)

    Pendant le 1er semestre 2020, des analyses complémentaires seront parallèlement réalisées sur des macrophages de patients X-ALD (obtenus à partir de monocytes sanguins différenciés in vitro) en collaboration avec l’équipe du Professeur Johannes Berger, Autriche. Ainsi les résultats obtenus sur la microglie de souris seront confrontés à ceux obtenus sur des macrophages de patients X-ALD.

    Correction des fonctions microgliales – tests préliminaires

    L’effet de molécules naturelles sera évalué au niveau du stress oxydant puisque le labo a mis au point un test de dosage des ROS sur plaques 96 puits permettant de faire du criblage. L’activité biologique des molécules issues d’huile d’argan, de raquettes de cactus, d’huile d’olives, de vin, de grenade et d’eucalyptus s’intègre au sein du consortium Franco-Allemeand NutRedOx. Il restera à mettre en évidence si les molécules sélectionnées sur la base d’un stress oxydant corrigé, permettront également de corriger les fonctions microgliales étudiées dans le cadre du stage de M2R, à savoir rétablissement de la signature homéostatique et retour à une capacité normale de phagocytose.

    PERSPECTIVES

    Intitulé possible de la thèse qui fera suite au M2R : modèle cellulaire de phagocytose comme outil pour identifier de nouvelles cibles thérapeutiques dans l’adrénoleukodystrophie liée à l’X.

     

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  • Cyto Magh 2018

     

    Télécharger la plaquette ICI

     

    Conférence 1 (en diaporama ici) :
    Caractérisation et méthodes d’études de la mort cellulaire par cytométrie en flux

     

    Conférence 2 (en diaporama partie 1 ici) (Partie 2 ici):
    Cytométrie en flux appliquée à l’étude de :

    • La prolifération et du contenu en ADN
    • La viabilité cellulaire
    • Des organites cellulaires
    • Du stress oxydant et de l’inflammation (analyse multiplexe)

     

    Conférence 3(en diaporama ici) :
    Métabolisme Lipidique et Mort Cellulaire

     

    Conférence 4 (en diaporama partie 1 ici) (partie 2 ici):
    Analyses Cytokiniques par Cytométrie en Flux

     

    cyto2018mag

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  • Master Pro " Technologies Cellulaires et Moléculaires en BioSanté"

     

    - Apoptose, Nécrose/Nécroptose, Pyroptose et Autophagie : Caractéristiques et Méthodes d’Etudes (le cours en diapo)

    - Alternatives à l’Expérimentation Animale 

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  • NMS Adhérents

    NMS se développe et se diversifie d'années en années.
    Parmi les pays du pourtour méditerranéen nous comptons outre la France (Bourgogne-Franche-Comté, Rhône-Alpes-Auvergne, PACA, Ile de France), l'Espagne, l'Italie, le Maroc, la Tunisie, l'Algérie, et le Liban. Et parmi les professions, on trouve des chercheurs académiques, des chefs d'entreprises, des éditeurs, des médecins, des pharmaciens, des vignerons, des nutritionnistes, etc.

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  • NMS Newsletters

    Le 4 juillet dernier une équipe de tournage de la télévision brésilienne Globo est venue à l'Université de Bourgogne, laboratoire Bio-PeroxIL interviewer le Professeur Norbert Latruffe, Président de NMS, sur le thème "Quoi de nouveau sur le resvératrol" depuis l'émission de 2009.

    15 novembre 2018 - Newsletter

     

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  • NMS agenda

    • L'assemblée générale de NMS 2019 se tiendra à Arbois (Jura) le 1er juin 2019 suivie d'une session scientifique "sur les traces de Pasteur de du vn jaune"
    • Rappel : l'assemblée générale de NMS 2018 s'est tenue le samedi 9 juin 2018 à la cave de Tain l’Hermitage (Vallée du Rhône) (Programme de la journée ici ...)

    <AG NMS Tain 2018

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  • NMS bourse jeunes chercheurs

    Bourse de voyage NMS 2019


    L’association Nutrition Méditerranéenne et Santé (NMS) offre une bourse avec le soutien de Madame Claude Taesch-Mesnage à un(e) étudiant(e) de Master 2 ou de Doctorat méritant(e).

    La bourse, d’un montant de 500 €, est destinée à contribuer à couvrir les frais d’un séjour de recherche ou présenter ses résultats à un congrès (poster ou communication orale) en 2019.

    • Le thème couvert devra concerner la nutrition (si possible de type méditerranéenne) en relation avec la santé. Il inclut le vin et ses composants, les ingrédients d’une cuisine saine et de qualité.
    • Les aspects relevant des sciences humaines, économiques et sociales seront également considérés.

    Le dossier de candidature devra être envoyé avant le 15 décembre 2018.
    La notification des bourses aura lieu début 2019.
    Le dossier devra comprendre :

    • Le CV (1 page)
    • Pour un congrès, une copie du résumé (1 page) et de l’acceptation du comité d’organisation
    • Pour un séjour de recherche, le projet de recherche (1 page) et l’adresse et les dates de séjour.

    Site NMS : http://anms.e-monsite.com/pages/les-actions.html
    Le dossier est à envoyer en version électronique au Président de l’association NMS :
    Prof. Norbert Latruffe, Université de Bourgogne. Laboratoire Bio-PeroxIL, 6 Boulevard Gabriel, F21000 Dijon France - Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.

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  • NMS Anglais

    Presentation of the mediterranean diet and health association (NMS)

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  • Manipulation de prélèvements humains en L2

    • Manipulation de prélèvements humains en L2

    Courrier du 23/06/207 (lire la lettre ici)

    Aux titulaires, étudiants et stagiaires du laboratoire Bio-PeroxIL
    Christian Beyer (Ingénieur INSERM), Pascale Bouchot (Ingénieure Hygiène & Sécurité de l'Université), Dr Anne Carrère (Médecin du travail)

     

    Objet : Manipulation de prélèvements humains


    Au cours de la réunion de laboratoire du lundi 19 juin 2017, à la suite de la formation Hygiène & Sécurité réalisée par Christian Beyer (INSERM Strasbourg) concernant les manipulations L2, suivie par plusieurs membres du laboratoire, il a été mentionné que les prélèvements humains devaient être techniques sous PSM en L2. Après renseignements pris auprès de Christian Beyer, je confirme cette information. Dans le cadre de nos études cliniques, lorsque du sang humain sera utilisé, il conviendra donc de faire toutes les manipulations en L2 jusqu'à ce que le matériel biologique, suite aux différents traitements, ne présente plus aucun risque infectieux (lorsque des cellules entières seront utilisées, par exemple pour analyse en cytométrie hors du L2, elles devront être resuspendues dans du PBS contenant du paraformaldehyde).

    Comme nous allons être amenés à manipuler du sang  umain au laboratoire, nous établirons une liste du personnel exposé que nous transmettrons au médecin du travail. Nous désignerons aussi un médecin réfèrent du CHU de Dijon spécialiste en maladies infectieuses, qu'il conviendra d'avertir en cas d'incident.

    Les vaccinations à faire et les contrôles de leur protection sont à discuter personnellement avec le médecin du travail par chaque personne exposée. Le médecin jugera alors s'il est souhaitable de vacciner.

    Par ailleurs, concernant le risque infectieux potentiel des prélèvements fournis par les services cliniques et par le centre de ressources  biologiques de Dijon, je n'ai, jusqu'à ce jour, pas encore eu de réponses (renseignements demandés en début de semaine).

    Merci de prendre en compte ces informations et d'appliquer dès maintenant les consignes de sécurité qui s'y rapportent.

    Des recommandations et des procédures précises vous parviendront au plus tard pour septembre
    2017.
    Bien à Vous
    Dr Gérard LIZARD, Directeur du Bio-Peroxil

     

     

    Courrier du 20/09/2017 (lire la lettre ici)

    Suite aux entretiens téléphoniques et à l’échange des mails avec Christian Beyer (Chargé de mission risques biologiques Délégation Régionale Inserm Est), nos locaux (L2) sont aux normes pour manipuler du sang humain. 

    Il faut que les personnes soient considérées aptes à manipuler du matériel humain (sang, tissus …) par un médecin (médecine préventive pour les étudiants ou médecine du travail pour les salariés). S’il s’agit de sang qualifié par l’EFS, la vaccination Hépatite B peut ne pas être demandée mais la décision reste de la responsabilité du médecin.

    Cordialement
    Gérard Lizard

    PS : Informations également transmises par mail à Pascale Bouchot, Ingénieure Hygiène et Sécurité de l’Université Bourgogne, le 15 septembre 2017.

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  • Science & Santé

    sc et santé 029

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